四月技術(shù)總結(jié)交流ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

     在綿綿春雨的伴隨之下，四月已將近過(guò)半。在這個(gè)月中，您都有哪些收獲呢？上海恒遠(yuǎn)公司結(jié)識(shí)了幾位客戶(hù)，并為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院李老師、山西醫(yī)科大學(xué)俞老師等客戶(hù)解決實(shí)驗(yàn)技術(shù)問(wèn)題。今天上午，我公司歐陽(yáng)博士對(duì)四月技術(shù)做出總結(jié)，與大家交流ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。
一、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法 
    ①ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
    ②平均OD值減去空白孔的OD值。
    ③制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等）并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近（+/-10%）。選擇擬合度zui高的那條曲線。
二、測(cè)定多個(gè)酶標(biāo)板時(shí)是否可以使用同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線？
    在測(cè)定不同板中的樣品時(shí)，每一個(gè)板都對(duì)應(yīng)一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。技術(shù)錯(cuò)誤或者不同的孵育情況，環(huán)境條件都會(huì)引起酶標(biāo)板之間產(chǎn)生不同結(jié)果。一條標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定的樣品值必需是在相同環(huán)境下產(chǎn)生的，否則就是無(wú)效值。 
三、溫馨提示
    如果樣品的OD值超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的zui高值，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該先將樣品稀釋從而得到準(zhǔn)確的濃度。樣品的zui終度應(yīng)該是計(jì)算出的濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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