考馬斯亮藍G－250染色法測定蛋白含量

 考馬斯亮藍G－250染色法測定蛋白含量 

1、實驗目的：掌握考馬斯亮藍G－250染色法測定蛋白含量的原理和方法。

2、實驗內(nèi)容

實驗原理：考馬斯亮藍G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結合，使染料的zui大吸收峰的位置（λmax），由465 nm變?yōu)?/span>595 nm，溶液的顏色由棕黑色變?yōu)樗{色。經(jīng)研究認為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別色精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結合。在595 nm下測得的吸光度A595 nm,與蛋白質(zhì)濃度成正比。

試劑與材料：

1. 標準蛋白質(zhì)溶液

稱取牛血清白蛋白（BSA）10mg，溶于100ml水，配置成100μg/ml的標準蛋白質(zhì)溶液。

2. 考馬斯亮藍G-250染料試劑

100 mg考馬斯亮藍G-250溶于50 ml95％的乙醇后，再加入120 ml85％的磷酸，用水稀釋至1 L。

3. 材料：豆芽

操作步驟：

1標準曲線的繪制

取試管6支按下表操作，搖勻，2～5 min后比色（595 nm），1管為空白對照管。作吸光度-蛋白濃度曲線。

2樣品蛋白濃度測定

準確稱取豆芽1.0000g，加入用10mL研磨成勻漿后，5000轉/分鐘離心10分鐘，將上清液轉入小燒杯中。

準確吸取樣品上清液1 ml置干凈試管中，加入考馬斯亮藍G-250染料5 ml并搖勻，2～5 min后比色（595 nm）。對照標準曲線求出樣品蛋白濃度。

上海恒遠ELISA試劑盒供應商是屬于國內(nèi)合資企業(yè)，也是生命科學試劑的運營商，銷售網(wǎng)絡已遍布全國各個科研單位，銷售的產(chǎn)品涵蓋了生物工程領域的各個方面，可提供的常規(guī)生化試劑、酶聯(lián)免疫試劑盒、細胞因子、抗體、等方面相關產(chǎn)品。在長期的銷售實踐中，我們形成了*的市場優(yōu)勢：產(chǎn)品齊全、價格合理、經(jīng)營穩(wěn)健、信息反饋及時、并能隨時隨地享受國外供應商zui直接、zui周到、zui完善的售后服務。