噬菌體試驗(yàn)的基本方法

（一）噬菌體的分離和純化

1 . 噬菌體的分離

每份未處理的污水樣品取100mL，混合后，經(jīng)36±1℃培養(yǎng)14~24h，通過孔徑為0.45mm的薄膜濾器，檢查濾液中是否有噬菌體的存在。用斑點(diǎn)試驗(yàn)法檢查噬菌體。

 2 . 單斑純化 

根據(jù)斑點(diǎn)試驗(yàn)法的結(jié)果，估計(jì)濾液內(nèi)噬菌體的數(shù)量。將濾液按百倍稀釋法作兩次連續(xù)稀釋。即吸取0.02mL，稀釋在2mL肉湯內(nèi)，使成10-2；再吸取此稀釋液0.02mL，稀釋在2mL肉湯內(nèi)，使成10-4。

（二）PFU和RTD

PFU和RTD是噬菌體效價(jià)的計(jì)量單位。PFU是噬斑形成單位，表示有感染能力的噬菌體數(shù)量，以每毫升內(nèi)的PFU表示（PFU/ml）。RTD是常規(guī)試驗(yàn)稀釋度，一般以平板上滴加噬菌體的部位剛剛能夠出現(xiàn)或剛剛不能出現(xiàn)完-全融合性裂解（CL）所需要的噬菌體稀釋度。

（三）噬菌體的制備

繁殖菌：制備噬菌體用的宿主菌稱為繁殖菌，噬菌體的繁殖菌應(yīng)予以凍干保存。

噬菌體種： 制備用的噬菌體種應(yīng)經(jīng)三次純化后保存，種子管先作PFU測(cè)定。

（四）裂解譜和裂解模式

裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。裂解譜的測(cè)定是為了確定該噬菌體在種內(nèi)或?qū)賰?nèi)的廣譜性，在種外或?qū)偻獾慕徊娣磻?yīng)性。

裂解模式是指幾種噬菌體組成為配套，各種細(xì)菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應(yīng)模式，不同的細(xì)菌，可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)模式。

裂解譜和裂解模式應(yīng)使用達(dá)到規(guī)定效價(jià)的噬菌體進(jìn)行測(cè)定。腸桿菌科診斷用噬菌體一般用原液進(jìn)行試驗(yàn)，效價(jià)要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之間。分型試驗(yàn)一般用1 RTD的噬菌體。

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