如何制備細(xì)胞懸液呢？

    細(xì)胞懸液是指single cell suspension。一般就是指把貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞消化吹打以后形成的懸液，一般會(huì)吹打多次，使粘連的細(xì)胞都分開(kāi)。當(dāng)然，本身是懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞的話(huà)，就不用消化了。

    制備細(xì)胞懸液

    （1）用75%酒精棉球消毒超凈工作臺(tái)臺(tái)面，然后用75%酒精棉球消毒雙手及暴露部位；

    （2）用75%酒精棉球消毒各培養(yǎng)用液的瓶蓋以及培養(yǎng)瓶瓶蓋部位，并在酒精燈外焰上方一過(guò)，擰開(kāi)瓶蓋，將瓶口再在酒精燈外焰上方一過(guò)后，擰上瓶蓋，但不要擰緊，以便下步操作；?

    （3）輕輕將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液倒入燒杯中，注意不要讓瓶口碰到燒杯，不要讓液體濺出；

    （4）吸取PE液3ml加入瓶?jī)?nèi)，加入時(shí)注意從側(cè)面加入而不能直接沖細(xì)胞貼壁處，避免造成細(xì)胞脫壁，然后蓋上蓋子，平放輕搖40下，輕輕倒出，要求倒干凈；

    （5）加入0.3ml的0.25%胰蛋白酶液，加入時(shí)直沖細(xì)胞貼壁處，平放輕搖，使酶液漫過(guò)整個(gè)瓶底部，一分鐘之內(nèi)將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡臺(tái)上進(jìn)行觀察，可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)漸漸回縮，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞慢慢變圓，用手掌拍打瓶底和瓶側(cè)，使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)并分散，呈懸浮狀；

    （6）立即加入5mlMEM+10%小牛血清，用吸管向瓶壁輕輕吹吸幾次，從培養(yǎng)瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結(jié)束，以確保所有底部都被吹到，使細(xì)胞全部從瓶壁脫落并形成均勻的細(xì)胞懸液；