ELISA檢測(cè)試劑盒吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體，適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型。“花板”問題是ELISA檢測(cè)試劑盒比較常見的一個(gè)問題，那么客戶在遇到這類問題時(shí)，該如何處理呢?
在ELISA檢測(cè)試劑盒結(jié)果"花板"的這一問題中，對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)造成很大影響，往往會(huì)使檢測(cè)者做出誤判，是實(shí)驗(yàn)中必須要注意和避免的。針對(duì)這個(gè)問題，我們建議從以下幾點(diǎn)出發(fā)：
一、標(biāo)本/試劑/儀器
1.標(biāo)本：出入境人員的血液標(biāo)本。
2.試劑：HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA檢測(cè)試劑盒。
3.儀器：腦心機(jī)，洗板機(jī)，酶標(biāo)儀。
二、方法。所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本，按照各個(gè)廠家提供的ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗(yàn)項(xiàng)目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
三、結(jié)果。所使用不同廠家的試劑有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“花板”問題。
四、分析
在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說(shuō)明書的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響外，ELISA檢測(cè)試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測(cè)的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國(guó)家和疾控中心報(bào)告陽(yáng)性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下，HBsAg在用Elisa之前都經(jīng)過(guò)了快速金標(biāo)試劑的檢測(cè)，陽(yáng)性標(biāo)本得到了一定的控制。因此，原因可能是在標(biāo)本的處理，特別是放置時(shí)間、離心速度和離心時(shí)間方面的問題。所以，標(biāo)本的處理就成為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要可疑因素。
為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn)，降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率，獲取準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，小編建議應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時(shí)的ELISA檢測(cè)試劑盒。
另外，小編再介紹下ELISA檢測(cè)試劑盒血清標(biāo)本的保存建議：
1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
2.血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
4.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
5.要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過(guò)氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
咨詢電話